核糖核酸
1990年,曾有科學家給矮牽牛花插入一種催生紅色素的基因,希望能夠讓花朵更鮮艷。但意想不到的事發(fā)生了:矮牽牛花完全褪色,花瓣變成了白色!科學界對此感到極度困惑。上世紀八十年代,托馬斯.R.切赫博士在研究RNA的成熟體結構中,發(fā)現了可以自我拼接的RNA催化作用(核糖核苷酸酶),并依此榮獲1989年諾貝爾化學獎。經過多年的深度研究,切赫博士在DNA基因遺傳過程中,發(fā)現了有趣的mRNA(信使RNA)和tRNA(轉運RNA),從而揭開了遺傳基因導致出生缺陷、大腦發(fā)育、營養(yǎng)吸收、細胞變異以及健康長壽等一系列人類生命密碼的神秘面紗。 mRNA(信使RNA)人類的遺傳信息主要貯存于DNA的堿基序列中,不過DNA并不直接決定蛋白質的合成。而在真核細胞中,DNA主要貯存于細胞核中的染色體上,而蛋白質的合成場所存在于細胞質中的核糖體上,因此需要有一種中介物質,才能把DNA上控制蛋白質合成的遺傳信息傳遞給核糖體。切赫博士把這種起著傳遞遺傳信息作用的特殊RNA。稱為信使RNA(messenger RNA,mRNA)。
簡單的說,mRNA就是為了完成基因表達過程中的遺傳信息傳遞。
令人遺憾的是,在遺傳轉錄形成的過程中,僅有25%序列經加工成為mRNA,其余的均呈現非編碼序列的前體mRNA形式,這些形式的mRNA在分子大小上差別很大,是導致出生缺陷、大腦發(fā)育、營養(yǎng)吸收、細胞變異以及健康長壽等一系列問題的基因遺傳因素的關鍵所在。
切赫博士歷經20年升華鉆研,成果破譯了mRNA編碼序列信息奧秘,通過特殊的生物干預手段,優(yōu)化mRNA的序列加工,篩查和剔除基因排列誘發(fā)基因和細胞突變的序列,不僅確保mRNA的序列加工的有效與增強,而且從根本上避免不良基因傳遞或傳遞序列問題引發(fā)細胞突變等一系列遺傳問題的發(fā)生。 mRNA編碼序列信息的成果破譯,奠定了OMG配方鹽技術的可行性基礎。
法爾和梅洛的發(fā)現科學家在矮牽?;▽嶒炛兴^察到的奇怪現象,其實是因為生物體內某種特定基因“沉默”了。導致基因“沉默”的機制就是RNA干擾機制。
此前,RNA分子只是被當作從DNA(脫氧核糖核酸)到蛋白質的“中間人”、將遺傳信息從“藍圖”傳到“工人”手中的“信使”。但法爾和梅洛的研究讓人們認識到,RNA作用不可小視,它可以使特定基因開啟、關閉、更活躍或更不活躍,從而影響生物的體型和發(fā)育等。 諾貝爾獎評審委員會在評價法爾和梅洛的研究成果時說:“他們的發(fā)現能解釋許多令人困惑、相互矛盾的實驗觀察結果,并揭示了控制遺傳信息流動的自然機制。這開啟了一個新的研究領域?!?/span> siRNA的作用原理
核糖核酸
RNA干涉(RNAi)在實驗室中是一種強大的實驗工具,利用具有同源性的雙鏈RNA(dsRNA)誘導序列特異的目標基因的沉寂,迅速阻斷基因活性。siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用,是對特定信使RNA(mRNA)進行降解的指導要素。siRNA是RNAi途徑中的中間產物,是RNAi發(fā)揮效應所必需的因子。siRNA的形成主要由Dicer和Rde-1調控完成。由于RNA病毒入侵、轉座子轉錄、基因組中反向重復序列轉錄等原因,細胞中出現了dsRNA,Rde-1(RNAi缺陷基因-1)編碼的蛋白質識別外源dsRNA,當dsRNA達到一定量的時候,Rde-1引導dsRNA與Rde-1編碼的Dicer(Dicer是一種RNaseIII活性核酸內切酶,具有四個結構域:Argonaute家族的PAZ結構域,III型RNA酶活性區(qū)域,dsRNA結合區(qū)域以及DEAH/DEXHRNA解旋酶活性區(qū))結合,形成酶-dsRNA復合體。在Dicer酶的作用下,細胞中的單鏈靶mRNA(與dsRNA具有同源序列)與dsRNA的正義鏈互換,原來dsRNA中的正義鏈被mRNA代替而從酶-dsRNA復合物中釋放出來,然后,在ATP的參與下,細胞中存在的一種RNA誘導的沉默復合體RNA-induced silencing complex(RISC,由核酸內切酶、核酸外切酶、解旋酶等構成,作用是對靶mRNA進行識別和切割)利用結合在其上的核酸內切酶的活性來切割dsRNA上處于原來正義鏈位置的靶mRNA分子中與dsRNA反義鏈互補的區(qū)域,形成21-23nt的dsRNA小片段,這些小片段即為siRNA。RNAi干涉的關鍵步驟是組裝RISC和合成介導特異性反應的siRNA蛋白。siRNA并入RISC中,然后與靶標基因編碼區(qū)或UTR區(qū)完全配對,降解靶標基因,因此說siRNA只降解與其序列互補配對的mRNA。其調控的機制是通過互補配對而沉默相應靶位基因的表達,所以是一種典型的負調控機制。siRNA識別靶序列是有高度特異性的,因為降解首先在相對于siRNA來說的中央位置發(fā)生,所以這些中央的堿基位點就顯得極為重要,一旦發(fā)生錯配就會嚴重抑制RNAi的效應。RNA干擾技術的前景
RNA干擾技術不僅是研究基因功能的一種強大工具,不久的未來,這種技術也許能用來直接從源頭上讓致病基因“沉默”,以治療癌癥甚至艾滋病,在農業(yè)上也將大有可為。從這個角度來說,“沉默”真的是金。美國哈佛醫(yī)學院研究人員已用動物實驗表明,利用RNA干擾技術可治愈實驗鼠的肝炎。 盡管尚有一些難題阻礙著RNA干擾技術的發(fā)展,但科學界普遍對這一新興的生物工程技術寄予厚望。這也是諾貝爾獎評審委員會為什么不堅持研究成果要經過數十年實踐驗證的“慣例”,而破格為法爾和梅洛頒獎的原因之一。
諾貝爾生理學或醫(yī)學獎評審委員會主席戈蘭·漢松說:“我們?yōu)橐环N基本機制的發(fā)現頒獎。這種機制已被全世界的科學家證明是正確的,是給它發(fā)個諾貝爾獎的時候了?!?/span>