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電泳緩沖液（用于穩(wěn)定體系酸堿度的緩沖溶液）

次瀏覽 | 更新時間：2023-05-19

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電泳緩沖液

用于穩(wěn)定體系酸堿度的緩沖溶液

電泳緩沖液是核酸、蛋白質凝膠電泳系統(tǒng)的一個重要組成，是電泳場中的導體，也是維持電泳系統(tǒng)恒定pH值的必要條件。其成分及其離子強度影響物質的電泳遷移率，應避免與被分離的樣品發(fā)生化學反應而改變樣品的理化性質或使其喪失生物活性。電泳緩沖液中的EDTA可螯合Mg離子等二價陽離子，防止電泳時激活DNA酶及Mg離子與核酸生成沉淀。

基本信息

中文名	電泳緩沖液
常見緩沖液	TAE、TBE、TPE和MOPS等
釋義	進行分子電泳時所使用的緩沖溶液
作用	穩(wěn)定體系酸堿度
特點	使用廣泛
隸屬	核酸、蛋白質凝膠電泳系統(tǒng)

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概述

電泳緩沖液是指在進行分子電泳時所使用的緩沖溶液，用以穩(wěn)定體系酸堿度。常見的核酸電泳緩沖液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。

作用

緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時陽極與陰極都會發(fā)生電解反應，陽極發(fā)生的是氧化反應（4OH--4e->2H2O+O2)，陰極發(fā)生的是還原反應（4H++4e->2H2)，長時間的電泳將使陽極變酸，陰極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應有較強的緩沖能力，使溶液兩極的pH保持基本不變。

電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢；太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。

電泳緩沖液還有一個組分是EDTA，加入濃度為1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+等離子，防止電泳時激活DNA酶，此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

特點

TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量（TBE中電泳時測出的相對分子質量會大于實際分子質量），且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小，長時間電泳（如過夜）不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。

TBE的特點是緩沖能力強，長時間電泳時可選用TBE，并且當用于電泳小于1kb的片段時分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結合的四羥基硼酸鹽復合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。

TPE的緩沖能力也較強，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。

配制方法

50×TAE Buffer配制方法：

1。稱量氨基丁三醇242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g于1L燒杯中；

2。向燒杯中加入約600ml去離子水，充分攪拌均勻；

3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；

4。用NaOH調pH至8.3，加去離子水定容至1L后，室溫保存。

使用時稀釋50倍即1×TAE Buffer

10×TBE Buffer配制方法：

1。稱量氨基丁三醇108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g于1L燒杯中；

2。加入約700ml去離子水，攪拌均勻；

3。用NaOH調pH至8.3，加去離子水定容至1L后，室溫保存。

使用時稀釋10倍即1×TBE Buffer

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