根據(jù)重組的機(jī)制和對(duì)蛋白質(zhì)因子的要求不同,可以將狹義的基因重組分為三種類型,即同源重組、位點(diǎn)特異性重組和異常重組。同源重組的發(fā)生依賴于大范圍的DNA同源序列的聯(lián)會(huì),在重組過程中,兩條染色體或DNA分子相互交換對(duì)等的部分。真核生物的非姊妹染色單體的交換、細(xì)菌以及某些低等真核生物的轉(zhuǎn)化、細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)接合、噬菌體的重組等都屬于這種類型。大腸桿菌的同源重組需要RecA蛋白,類似的蛋白質(zhì)也存在于其他細(xì)菌中。位點(diǎn)特異性重組發(fā)生在兩個(gè)DNA分子的特異位點(diǎn)上。它的發(fā)生依賴于小范圍的DNA同源序列的聯(lián)會(huì),重組也只限于這個(gè)小范圍。兩個(gè)DNA分子并不交換對(duì)等的部分,有時(shí)是一個(gè)DNA分子整合到另一個(gè)DNA分子中。這種重組不需要RecA蛋白的參與。異常重組發(fā)生在順序不相同的DNA分子間,在形成重組分子時(shí)往往依賴于DNA的復(fù)制而完成重組過程。例如,在轉(zhuǎn)座過程中,轉(zhuǎn)座因子從染色體的一個(gè)區(qū)段轉(zhuǎn)移到另一個(gè)區(qū)段,或從一條染色體轉(zhuǎn)移到另一條染色體。這種類型的重組也不需要RecA蛋白的參與。 基因重組的類型
基因重組是指一個(gè)基因的DNA序列是由兩個(gè)或兩個(gè)以上的親本DNA組合起來的?;蛑亟M是遺傳的基本現(xiàn)象,病毒、原核生物和真核生物都存在基因重組現(xiàn)象。減數(shù)分裂或體細(xì)胞有絲分裂均有可能發(fā)生基因重組?;蛑亟M的特點(diǎn)是雙DNA鏈間進(jìn)行物質(zhì)交換。真核生物,重組發(fā)生在減數(shù)分裂期同源染色體的非姊妹染色單體間,細(xì)菌可發(fā)生在轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,通常稱這類重組為同源重組(homologousrecombination),即只要兩條DNA序列相同或接近,重組可在此序列的任何一點(diǎn)發(fā)生。然而在原核生物中,有時(shí)基因重組依賴于小范圍的同源序列的聯(lián)會(huì),重組只限于該小范圍內(nèi),只涉及特定位點(diǎn)的同源區(qū),把這類重組稱作位點(diǎn)專一性重組(site-specificrecombination),此外還有一種重組方式,完全不依賴于序列間的同源性,使一段DNA序列插入另一段中,在形成重組分子時(shí)依賴于DNA復(fù)制完成重組,稱此類重組為異常重組(illegitimaterecombination),也稱復(fù)制性重組(replicativerecombination)。 噬菌體的基因重組
歷史:1936年F.M.Burnet發(fā)表了噬菌體能產(chǎn)生突變體,其噬菌斑的外形和野生型的有明顯區(qū)別,可惜的未能引起重視,以致噬菌體遺傳學(xué)延遲了十年才得以建立。 1946年第11屆冷泉港學(xué)術(shù)討論會(huì)上,在宣布一基因一酶學(xué)說的勝利,及Ledernerg、Tatum細(xì)菌雜交實(shí)驗(yàn)報(bào)告的同時(shí),Hershey和Luria宣布發(fā)現(xiàn)了噬菌體的r,h突變,Delbrück和Hershey發(fā)表了他們各自發(fā)現(xiàn)的噬菌體重組,這四項(xiàng)重大的發(fā)現(xiàn)分別在1958年和1969年獲得了諾貝爾獎(jiǎng)。后兩項(xiàng)的發(fā)現(xiàn)有力地推動(dòng)了噬菌體遺傳學(xué)的發(fā)展。
噬菌體的基因重組和細(xì)菌不同,而和真核的重組十分相似。雜交是用標(biāo)記不同的噬菌體之間進(jìn)行。然后計(jì)算重組噬菌體占總的子代噬菌體的比例來確定重組值。一般可以選用2-4個(gè)基因差異的噬菌體來混合感染細(xì)菌。首先把不同類型的噬菌體混合起來和細(xì)菌一起涂布在固體培養(yǎng)基上,細(xì)菌的濃度要達(dá)到可以長成菌苔(lawn)的水平,噬菌體的濃度要很稀。每個(gè)噬菌體感染一個(gè)細(xì)菌,經(jīng)過裂解周期,宿主細(xì)胞破裂后,釋放出的子噬菌體又去感染周圍的細(xì)菌,結(jié)果在菌苔上形成一個(gè)圓形清亮的斑,稱為噬菌斑(plaque),而一個(gè)噬菌斑來自最初涂布平板時(shí)的一個(gè)噬菌體。噬菌斑的形態(tài)必須選擇容易區(qū)別的,以表示噬菌體的相應(yīng)表型。單個(gè)的噬菌體只能在電鏡下才可觀察其形態(tài),突變引起其形態(tài)變化沒有電鏡是無法鑒別的,但突變影響到生活周期,會(huì)產(chǎn)生不同的噬菌斑,因此通過噬菌斑的觀察很容易觀察基因型的變化與重組。 Hershey等用T2噬菌體的兩個(gè)不同表型特征:噬菌斑的形態(tài)和宿主范圍來進(jìn)行雜交。一個(gè)噬菌體的基因型是h+r,另一個(gè)噬菌體的基因型是hr+。h+表示宿主范圍(hostrange),是野生型,能在E.coliB菌株上生長,r表示快速溶菌(rapidlysis),產(chǎn)生的噬菌斑大,邊緣清楚。h噬菌體能在E.coliB和B/2品系上生長,r+產(chǎn)生小而邊緣模糊的噬菌斑,能產(chǎn)生透明的噬菌斑,而h+因只能裂解E.coliB,所以在B和B/2的混合菌上產(chǎn)生的噬菌斑是半透明的。 雜交時(shí)hr+和h+r混合感染E.coliB和B/2,在B和B/2混合菌苔上出現(xiàn)了四種噬菌斑,表明hr+和h+r之間有一部分染色體在B菌株的細(xì)胞中進(jìn)行了重組,釋放出的子噬菌體有一部分的基因型為h+r+和hr。利用下面的公式就可以計(jì)算出和兩個(gè)位點(diǎn)的重組值: 重組值=(h+r++hr)/總噬菌斑數(shù)×100%