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免疫膠體金
用于生物醫(yī)學領(lǐng)域的免疫學方法
1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學，此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學方法，在生物醫(yī)學各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應用。目前在醫(yī)學檢驗中的應用主要是免疫層析法( immunochromatography)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)，用于檢測 HBsAg、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等，具有簡單、快速、準確和無污染等優(yōu)點。
基本信息
| 優(yōu)勢 | 簡單，快速，準確和無污染 |
介紹
膠體金是一種常用的標記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術(shù)，有其獨特的優(yōu)點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能例用到。
免疫膠體金技術(shù)的基本原理
膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。
膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結(jié)合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領(lǐng)域。
膠體金標記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。
免疫金標記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。
常用的免疫膠體金檢測技術(shù)
（1）免疫膠體金光鏡染色法
免疫膠體金電鏡染色法
可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合，然后進行負染?？捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。
（2）斑點免疫金滲濾法
（3）膠體金免疫層析法
將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。
原理及結(jié)果說明
原理：
抗體包被：單克隆抗體包被在檢測線處，抗金標抗體包被在對照線處，金標抗體吸附在固相載體無紡紗上。
利用抗原抗體特異性結(jié)合的免疫反應原理，在檢測線處形成抗體-待測抗原-金標抗體復合物，在對照線處形成抗金標抗體-金標抗體復合物。
結(jié)果說明
陽性：測試條上下兩端先后出現(xiàn)紅色反應線。
在吸水材料的牽引下，待測抗原在試條上向上走，首先與金標抗體結(jié)合成抗原抗體復合物，抗原抗體復合物上行到檢測線時，被測抗原的另一結(jié)合位點與包被在此處的單抗結(jié)合，形成兩個抗體結(jié)合一個抗原（雙抗體夾心）的金標復合物，因有金顆粒在此沉積，故檢測線顯紅色。未結(jié)合抗原的金標抗體上行到對照線時，與"抗金標抗體"結(jié)合，所以對照線也顯紅色。
陰性：測試條上端僅有一條紅色對照線出現(xiàn)。
待測標本中無被測抗原，測試條上只有金標抗體上行并與對照線處的抗體結(jié)合，使金顆粒沉積在此處而顯紅色。
無效：測試條上下兩端均無紅色對照線出現(xiàn)，表明試驗失敗或測試條失效。
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