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免疫膠體金
用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的免疫學(xué)方法
1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學(xué)，此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學(xué)方法，在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。目前在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用主要是免疫層析法( immunochromatography)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)，用于檢測 HBsAg、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等，具有簡單、快速、準(zhǔn)確和無污染等優(yōu)點。
基本信息
| 優(yōu)勢 | 簡單，快速，準(zhǔn)確和無污染 |
介紹
膠體金是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)，有其獨特的優(yōu)點。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能例用到。
免疫膠體金技術(shù)的基本原理
膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。
膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。
膠體金標(biāo)記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。
免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。
常用的免疫膠體金檢測技術(shù)
（1）免疫膠體金光鏡染色法
細(xì)胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標(biāo)記的抗體進(jìn)行染色，也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上，以銀顯影液增強標(biāo)記，使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標(biāo)記的敏感性。
免疫膠體金電鏡染色法
可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合，然后進(jìn)行負(fù)染?？捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。
（2）斑點免疫金滲濾法
（3）膠體金免疫層析法
將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。
原理及結(jié)果說明
原理：
抗體包被：單克隆抗體包被在檢測線處，抗金標(biāo)抗體包被在對照線處，金標(biāo)抗體吸附在固相載體無紡紗上。
利用抗原抗體特異性結(jié)合的免疫反應(yīng)原理，在檢測線處形成抗體-待測抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物，在對照線處形成抗金標(biāo)抗體-金標(biāo)抗體復(fù)合物。
結(jié)果說明
陽性：測試條上下兩端先后出現(xiàn)紅色反應(yīng)線。
在吸水材料的牽引下，待測抗原在試條上向上走，首先與金標(biāo)抗體結(jié)合成抗原抗體復(fù)合物，抗原抗體復(fù)合物上行到檢測線時，被測抗原的另一結(jié)合位點與包被在此處的單抗結(jié)合，形成兩個抗體結(jié)合一個抗原（雙抗體夾心）的金標(biāo)復(fù)合物，因有金顆粒在此沉積，故檢測線顯紅色。未結(jié)合抗原的金標(biāo)抗體上行到對照線時，與"抗金標(biāo)抗體"結(jié)合，所以對照線也顯紅色。
陰性：測試條上端僅有一條紅色對照線出現(xiàn)。
待測標(biāo)本中無被測抗原，測試條上只有金標(biāo)抗體上行并與對照線處的抗體結(jié)合，使金顆粒沉積在此處而顯紅色。
無效：測試條上下兩端均無紅色對照線出現(xiàn)，表明試驗失敗或測試條失效。
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