原理

利用酶標(biāo)記抗原（抗體）和待測抗體（抗原）在電場中向一定方向移動(dòng)，在比例適當(dāng)?shù)牡胤叫纬沙恋砭€，通過酶作用底物而顯色，指示沉淀線的存在。該法的敏感性大大高于對(duì)流免疫電泳。

本試驗(yàn)以檢測血吸蟲抗體為例。

材料試劑

1．0.02Mol/pH8.6巴比妥緩沖液

巴比妥0.553g

巴比妥鈉3.503g

乳酸鈣0.512g

H2O加至1000ml

2．0.1Mol/LpH7.0PBS（0.14Mol/LNacl）

3．0.2Mol/LpH7.6硼酸緩沖液

硼酸10.510g

硼砂2.860g

H2O加至1000ml

操作方法

酶免疫電泳

1．酶標(biāo)抗原的制備用1ml血吸蟲卵抗原（蛋白含量為1.5mg/ml~2.0mg/ml）加入3mg~4mg辣根過氧化物酶（蛋白質(zhì)：酶=1︰2），液體呈棕紅色，然后在輕輕攪拌下，緩慢加入50μl1％戊二醛，要求在5min~10min內(nèi)滴加完畢。置20℃~25℃攪拌2h。裝入透析袋，于1000ml、0.1Mol/LpH7.0PBS液4℃透析2天，并換液3次~4次。取出酶標(biāo)記物加等量純甘油，使含50％甘油試劑，即為酶標(biāo)抗原。分裝小瓶，存于-20℃中備用。

2．瓊脂凝膠板的制備取優(yōu)質(zhì)瓊脂，以0.02Mol/LpH8.6巴比妥緩沖液制成1％瓊脂，溶化后，置于玻片上，制成2mm厚的凝膠板。

3．打孔加樣打6對(duì)孔，抗原孔徑為0.30cm，抗體孔為長方形0.2cm?.1cm?？乖?、抗體各加5μl及50μl?？乖蒙鲜雒笜?biāo)抗原做1︰20至1︰30稀釋。

4．電泳抗原孔置于負(fù)極，電壓4V/cm~5V/cm，電泳時(shí)間45min~60min，電泳后，于蒸餾水中蕩洗1min~2min即可，用濾紙吸去水分，并用毛細(xì)吸管吸盡長孔及圓孔中的水液后，即可用底物的溶液顯色。

5．配制底物溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。將飽和聯(lián)苯胺溶液，加等量pH7.6硼酸緩沖液，然后將上液9份和0.1％過氧化氫1份相混，即為所需的底物溶液。

6．免疫酶染色將瓊脂凝膠板置于培養(yǎng)皿中，緩緩傾入底物溶液，直至浸沒凝膠板為止，置于室溫或37℃，經(jīng)1h~2h用目測可觀察反應(yīng)結(jié)果。

結(jié)果判定

1．陽性反應(yīng)：在抗原抗體孔之間呈現(xiàn)明顯的棕紅色的線條。

2．陰性反應(yīng)：不出現(xiàn)棕紅色線條者。

相關(guān)詞條

抗原、沉淀線、血吸蟲抗體、巴比妥、巴比妥鈉