GOD-POD法（用來(lái)測(cè)定血清葡萄糖的方法）

化學(xué)式

葡萄糖氧化酶的每個(gè)酶分子中含有兩分子

（葡萄糖）-----------（葡萄糖酸

作用時(shí)，葡萄糖脫下的氫交給FAD，使之成FAD.2H，然后FAD.2H與氧作用，生成

試劑

1．0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 稱取無(wú)水磷酸氫二鈉8.67g及無(wú)水磷酸二氫鉀5.3g溶于蒸餾水800ml中，用1mol/L氫氧化鈉(或1mol/L鹽酸)調(diào)pH至7.0，用蒸餾水定容至1L。

2．酶試劑稱取過(guò)氧化物酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg，溶于磷酸鹽緩沖液80ml中，用1 mol/L

3．酚溶液稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。

4．酶酚混合試劑酶試劑及酚溶液等量混合，4℃可以存放1個(gè)月。

5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸餾水約800ml中，加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至l L。

6．100mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液稱取已干燥恒重的無(wú)水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。

7．5mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。

操作步驟

1．自動(dòng)分析法按儀器說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行測(cè)定。

2．手工操作法取試管3支，按下表操作。

葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖操作步驟

加入物(ml) 空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管

血清－－ 0.02

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液－ 0.02 －

蒸餾水 0.02 －－

酶酚混合試劑 3.0 3.0 3.0

混勻，置37℃水浴中，保溫15min，在波長(zhǎng)505nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度。

計(jì)算

用以下公式計(jì)算活性：

式中：E436――每分鐘吸光度的變化（436nm處）(15次的平均值)

Ew――67μl所用酶液中含酶的重量（0.00004958mg）

8.3――1μmol鄰-聯(lián)二茴香胺/mL的吸光度（436nm處）

2.067――反應(yīng)混合物的總體積

GOD:

15min的平均值：

4min的平均值：

【參考范圍】空腹血清葡萄糖為3.89～6.11mmol/L。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖酸和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的作用下使鄰聯(lián)甲苯胺生成藍(lán)色物質(zhì)，此有色物質(zhì)在625nm

臨床意義

1．生理性高血糖可見(jiàn)攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺分泌增加時(shí)。

2．病理性高血糖

(1) 糖尿?。翰±硇愿哐浅Ｒ?jiàn)于胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足的糖尿病患者。

(2) 內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進(jìn)，腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進(jìn)。引起的各種對(duì)抗胰島素的激素分泌過(guò)多也會(huì)出現(xiàn)高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。

(3) 顱內(nèi)壓增高：顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內(nèi)出血、腦膜炎等。

(4) 脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。

3．生理性低血糖見(jiàn)于饑餓和劇烈運(yùn)動(dòng)。

4．病理性低血糖(特發(fā)性功能性低血糖最多見(jiàn)，依次是藥源性、肝源性、胰島素瘤等)

(1) 胰島β細(xì)胞增生或胰島β細(xì)胞瘤等，使胰島素分泌過(guò)多。

(2) 對(duì)抗胰島素的激素分泌不足，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質(zhì)功能減退和甲狀腺功能減退而使生長(zhǎng)素、腎上腺皮質(zhì)激素分泌減少。

(3) 嚴(yán)重肝病患者，由于肝臟儲(chǔ)存糖原及糖異生等功能低下，肝臟不能有效地調(diào)節(jié)血糖。

注意事項(xiàng)

1．葡萄糖氧化酶對(duì)β-D葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約

2．葡萄糖氧化酶法可直接測(cè)定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測(cè)定尿液葡萄糖含量。因?yàn)槟蛞褐心蛩岬雀蓴_物質(zhì)濃度過(guò)高，可干擾過(guò)氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。

3．測(cè)定標(biāo)本以草酸鉀－氟化鈉為抗凝劑的血漿較好。取草酸鉀6g，氟化鈉4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到試管內(nèi)，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天內(nèi)不凝固并抑制糖分解。

4．本法用血量甚微，操作中應(yīng)直接加標(biāo)本至試劑中，再吸試劑反復(fù)沖洗吸管，以保證結(jié)果可靠。

5．嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無(wú)蛋白血濾液，然后再進(jìn)行測(cè)定。

【評(píng)價(jià)】線性范圍至少可達(dá)22.24mmol/L，回收率9

本法測(cè)定葡萄糖非常特異，從原理反應(yīng)式中可知第一步是特異反應(yīng)，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應(yīng)的第二步。一些還原性物質(zhì)如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)過(guò)氧化氫，從而消耗反應(yīng)過(guò)程中所產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制，使測(cè)定結(jié)果偏低。然而，在本法的測(cè)定條件下，溶血標(biāo)本血紅蛋白的濃度達(dá)10g/L，黃疸標(biāo)本膽紅素濃度達(dá)342μmol /L，維生素C小于30mg/L，均不影響測(cè)定結(jié)果。氟化鈉濃度達(dá)2g/L不干擾測(cè)定結(jié)果。標(biāo)本中含尿素濃度達(dá)46.7mmol/L，尿酸濃度達(dá)2.95mmol/L，肌酐濃度達(dá)4.42mmol/L。半胱氨酸濃度達(dá)3.30mmol/L，甘油三酯濃度達(dá)5.6mmol/L，膽固醇4.40 mmol/L，對(duì)測(cè)定結(jié)果均無(wú)顯著影響。

左旋多巴100mg/L，維生素C 5mg/L以上，谷胱甘肽100mg/L時(shí)，可引起負(fù)誤差；半胱氨酸達(dá)10mmol/L時(shí)，產(chǎn)生相當(dāng)0.72mmol/L葡萄糖的正誤差。