化學式

葡萄糖氧化酶的每個酶分子中含有兩分子

（黃素腺嘌呤=核苷酸）作為受氫體催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫：

（葡萄糖）-----------（葡萄糖酸

）

作用時，葡萄糖脫下的氫交給FAD，使之成FAD.2H，然后FAD.2H與氧作用，生成

。

試劑

1．0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 稱取無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g溶于蒸餾水800ml中，用1mol/L氫氧化鈉(或1mol/L鹽酸)調pH至7.0，用蒸餾水定容至1L。

2．酶試劑稱取過氧化物酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg，溶于磷酸鹽緩沖液80ml中，用1 mol/L

調pH至7.0，用磷酸鹽緩沖液定容至100ml，置4℃保存，可穩(wěn)定3個月。

3．酚溶液稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。

4．酶酚混合試劑酶試劑及酚溶液等量混合，4℃可以存放1個月。

5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸餾水約800ml中，加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至l L。

6．100mmol/L葡萄糖標準貯存液稱取已干燥恒重的無水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。

7．5mmol/L葡萄糖標準應用液吸取葡萄糖標準貯存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。

操作步驟

1．自動分析法按儀器說明書的要求進行測定。

2．手工操作法取試管3支，按下表操作。

葡萄糖氧化酶法測血糖操作步驟

加入物(ml) 空白管標準管測定管

血清－－ 0.02

葡萄糖標準應用液－ 0.02 －

蒸餾水 0.02 －－

酶酚混合試劑 3.0 3.0 3.0

混勻，置37℃水浴中，保溫15min，在波長505nm處比色，以空白管調零，讀取標準管及測定管吸光度。

計算

用以下公式計算活性：

式中：E436――每分鐘吸光度的變化（436nm處）(15次的平均值)

Ew――67μl所用酶液中含酶的重量（0.00004958mg）

8.3――1μmol鄰-聯(lián)二茴香胺/mL的吸光度（436nm處）

2.067――反應混合物的總體積

GOD:

15min的平均值：

;

;

4min的平均值：

;

,

【參考范圍】空腹血清葡萄糖為3.89～6.11mmol/L。

實驗結論

葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖酸和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下使鄰聯(lián)甲苯胺生成藍色物質，此有色物質在625nm

臨床意義

1．生理性高血糖可見攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺分泌增加時。

2．病理性高血糖

(1) 糖尿病：病理性高血糖常見于胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。

(2) 內分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進，腎上腺皮質功能及髓質功能亢進。引起的各種對抗胰島素的激素分泌過多也會出現(xiàn)高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。

(3) 顱內壓增高：顱內壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內出血、腦膜炎等。

(4) 脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。

3．生理性低血糖見于饑餓和劇烈運動。

4．病理性低血糖(特發(fā)性功能性低血糖最多見，依次是藥源性、肝源性、胰島素瘤等)

(1) 胰島β細胞增生或胰島β細胞瘤等，使胰島素分泌過多。

(2) 對抗胰島素的激素分泌不足，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質功能減退和甲狀腺功能減退而使生長素、腎上腺皮質激素分泌減少。

(3) 嚴重肝病患者，由于肝臟儲存糖原及糖異生等功能低下，肝臟不能有效地調節(jié)血糖。

注意事項

1．葡萄糖氧化酶對β-D葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約

為

型，

為

型。葡萄糖的完全氧化需要

型到

型的變旋反應。國外某些商品葡萄糖氧化酶試劑盒含有葡萄糖變旋酶，可加速這一反應，但在終點法中，延長孵育時間可達到完成自發(fā)變旋過程。新配制的葡萄糖標準液主要是

型，故須放置2h以上(最好過夜)，待變旋平衡后方可應用。

2．葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾物質濃度過高，可干擾過氧化物酶反應，造成結果假性偏低。

3．測定標本以草酸鉀－氟化鈉為抗凝劑的血漿較好。取草酸鉀6g，氟化鈉4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到試管內，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天內不凝固并抑制糖分解。

4．本法用血量甚微，操作中應直接加標本至試劑中，再吸試劑反復沖洗吸管，以保證結果可靠。

5．嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清應先制備無蛋白血濾液，然后再進行測定。

【評價】線性范圍至少可達22.24mmol/L，回收率9

，批內CV為

。批間CV為

左右，日間CV為

。葡萄糖氧化酶法與己糖激酶法比較，73份標本葡萄糖氧化酶法均值為8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相關系數(shù)為0.9986，回歸方程

。

本法測定葡萄糖非常特異，從原理反應式中可知第一步是特異反應，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應的第二步。一些還原性物質如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質競爭過氧化氫，從而消耗反應過程中所產(chǎn)生的過氧化氫，產(chǎn)生競爭性抑制，使測定結果偏低。然而，在本法的測定條件下，溶血標本血紅蛋白的濃度達10g/L，黃疸標本膽紅素濃度達342μmol /L，維生素C小于30mg/L，均不影響測定結果。氟化鈉濃度達2g/L不干擾測定結果。標本中含尿素濃度達46.7mmol/L，尿酸濃度達2.95mmol/L，肌酐濃度達4.42mmol/L。半胱氨酸濃度達3.30mmol/L，甘油三酯濃度達5.6mmol/L，膽固醇4.40 mmol/L，對測定結果均無顯著影響。

左旋多巴100mg/L，維生素C 5mg/L以上，谷胱甘肽100mg/L時，可引起負誤差；半胱氨酸達10mmol/L時，產(chǎn)生相當0.72mmol/L葡萄糖的正誤差。