離子對(duì)試劑（由強(qiáng)親水離子形成的試劑）

概念

一、離子對(duì)試劑的定義：離子對(duì)試劑是由強(qiáng)親水離子形成，反作用于樣品分子的中性離子對(duì)。因此，可用于同時(shí)分離帶電分子和非帶電分子。

二、適用范圍：一般可適用所有色譜固定相。當(dāng)使用長(zhǎng)鏈的離子對(duì)試劑時(shí)，如：十六烷基硫酸銨或十二烷基硫酸鈉，色譜柱將選用反相色譜柱。

三、使用濃度：離子對(duì)試劑的適用濃度短鏈離子對(duì)試劑：5×10mol/L 長(zhǎng)鏈離子對(duì)試劑：5×10mol/L

作用

使用液相色譜法分析電離能力比較強(qiáng)的樣品時(shí)，樣品在反相色譜柱上的保留時(shí)間很短或者根本不保留，這時(shí)要加入相應(yīng)的離子對(duì)試劑，將分析物上的離子進(jìn)行結(jié)合，形成在柱子上有保留的分子。就像是一個(gè)物質(zhì)要穿色譜柱而過(guò)時(shí)，我們使用離子對(duì)試劑將它留住。

離子對(duì)試劑是在高效液相色譜法中引入了離子色譜方法的一種表現(xiàn)。它主要是作用于樣品和固定相之間的一種物質(zhì)，所以在選擇離子對(duì)試劑時(shí)，要考慮色譜柱的填料和樣品的酸堿性。

選擇

離子對(duì)試劑的種類(lèi)和濃度對(duì)分離效果都有較大的影響。離子對(duì)試劑種類(lèi)的選擇依賴于被分離樣品的性質(zhì)。被分離溶質(zhì)是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，離子對(duì)試劑可以是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，弱堿或強(qiáng)酸，弱酸，如被分離的溶質(zhì)是弱酸或弱堿，則選用的離子對(duì)試劑必須是強(qiáng)堿或強(qiáng)酸。對(duì)于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)相差較大的混合樣品，離子對(duì)試劑種類(lèi)的選擇并沒(méi)有特殊要求。離子對(duì)試劑疏水性的差別可以通過(guò)調(diào)節(jié)離子對(duì)試劑濃度和有機(jī)溶劑濃度獲得滿意的分離效果。離子對(duì)試劑用于高壓液相離子對(duì)萃取的液相色譜法分離分析強(qiáng)極性有機(jī)酸和有機(jī)堿的好方法。廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)，藥物學(xué)，和石油化工等領(lǐng)域。

一、用于酸性化合物：四丁基氫氧化銨（10%水溶液） 、四丁基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨

二、用于堿性化合物：戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉

離子對(duì)試劑是高效液相色譜專(zhuān)用試劑，主要分析測(cè)試有機(jī)堿類(lèi)離子化合物，代替離子交換法，具有可靠的分離效果。也可用于分析多肽和蛋白質(zhì)，是制備抗靜電聚脂纖維的中間體。

常用離子對(duì)試劑

1-戊烷磺酸鈉 CAS:22767-49-3

1-己烷磺酸鈉 CAS:2832-45-3

1-庚烷磺酸鈉 CAS:22767-50-6

1-辛烷磺酸鈉 CAS:5324-84-5

1-癸烷磺酸鈉 CAS:13419-61-9

選用步驟

1. 選擇一根適合的色譜柱，常為C18柱；

2.準(zhǔn)備流動(dòng)相時(shí)僅使用HPLC級(jí)別的水和色譜級(jí)試劑；

3.選擇能給出最佳分離度的流動(dòng)相成分和濃度；

4.如果樣品中有非離子化物質(zhì)，在嘗試離子化分離之前首先優(yōu)化分離情況；

5.選擇合適的離子對(duì)系列試劑以提供相應(yīng)的離子配對(duì)：對(duì)于酸性分析物使用酸性離子對(duì)試劑；對(duì)于堿性分析物使用堿性離子對(duì)試劑；

6.通過(guò)比較選擇所得分離度最好的離子對(duì)試劑；

7.一旦離子對(duì)試劑已經(jīng)確定，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值將分離度最大化；因?yàn)槲⑿〉膒H值改變對(duì)保留性質(zhì)和選擇性都有較大的影響，所以仔細(xì)小心的小幅度調(diào)節(jié)pH值；

8.理想狀況下，流動(dòng)相中的離子對(duì)試劑濃度應(yīng)為0.005M，但是稍微增加離子對(duì)試劑可能會(huì)稍微增加保留性質(zhì)并因此優(yōu)化分離情況。

優(yōu)點(diǎn)

在過(guò)去，帶電荷分析物的色譜分離通過(guò)離子抑制（小心調(diào)節(jié)流動(dòng)相PH值以使分析物非離子化）來(lái)達(dá)到。然而，要確定離子抑制狀態(tài)下的最佳流動(dòng)相PH值，卻往往需要額外的摸索過(guò)程。含有一個(gè)以上的可離子化成分的樣品，通常是不穩(wěn)定的。離子抑制的局限性導(dǎo)致了一種新的、更普遍適用的方法進(jìn)行可離子化物質(zhì)色譜分離的方法：離子對(duì)色譜。

離子對(duì)色譜由Gordon Schill博士于1973年建立，其方法是將離子性化合物添加到流動(dòng)相中以促使離子與帶電荷分析物形成配對(duì)離子。這些試劑由帶有可離子化終端的烷基鏈組成。當(dāng)在反相條件下用于常見(jiàn)的憎水性HPLC固定相時(shí)，離子對(duì)試劑可選擇性的增加帶電荷分析物的保留時(shí)間。

盡管離子交換色譜已經(jīng)成為常見(jiàn)的分離模式，它并非在所有情況下都起作用。較離子交換色譜，離子對(duì)色譜的優(yōu)點(diǎn)在于：

??緩沖液制備簡(jiǎn)單；

??碳鏈長(zhǎng)度選擇眾多，可用于增加保留時(shí)間、改善分離性質(zhì)；

??顯著縮短分離時(shí)間；

??同時(shí)分離離子化和非離子化分析物；

??有效改善峰形

缺點(diǎn)

對(duì)色譜柱傷害較大。離子對(duì)試劑會(huì)對(duì)色譜柱造成不可逆的傷害，離子對(duì)試劑和固定相結(jié)合產(chǎn)生不可逆吸附，進(jìn)而影響固定相活性位點(diǎn)。比如十八烷基硅膠鍵合色譜柱，離子對(duì)試劑會(huì)影響色譜柱鍵合，從而達(dá)到分析樣品的作用。這種反應(yīng)對(duì)色譜柱影響很大，而且離子對(duì)試劑很難從色譜柱上沖洗干凈，會(huì)大大縮短色譜柱的使用壽命。

實(shí)驗(yàn)條件不穩(wěn)定。離子對(duì)試劑的濃度與其樣品的保留時(shí)間有直接的影響，而且離子對(duì)試劑對(duì)pH值比較敏感，配制流動(dòng)相時(shí)要求精確度較高。否則直接影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和重現(xiàn)性